細(xì)胞復(fù)蘇是一簡單的試驗操作，但操作中有許多需要注意的事項，在實驗操作中注意細(xì)小問題，才能使復(fù)蘇后的細(xì)胞狀態(tài)保持良好?，F(xiàn)將細(xì)胞復(fù)蘇的操作程序和注意事項總結(jié)如下。

1. 細(xì)胞實驗室進(jìn)行常規(guī)消毒，紫外照射30 min以上，超凈臺開啟通風(fēng)10 min。

2. 將新鮮培養(yǎng)基置于37℃恒溫水浴鍋中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭，移入無菌操作臺內(nèi)。將10 ml左右新鮮培養(yǎng)基移入無菌細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，備用。

3. 從液氮保存罐中取出凍存管，立即放入40℃水浴中，輕搖冷凍管使其在快速全部融化，以70 % 酒精擦拭凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

4. 將細(xì)胞懸液移入已加培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，放CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5. 待細(xì)胞貼壁后（根據(jù)細(xì)胞種類貼壁時間不同，一般4小時左右），棄去含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

【注意事項】

1. 取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。

2. 常溫下二甲基亞砜（DMSO）對細(xì)胞的毒副作用較大，因此，必須在1~2 min內(nèi)使凍存液*融化。如果復(fù)蘇溫度太低，會造成細(xì)胞的損傷，所以選擇40℃復(fù)蘇。

3. 貼壁細(xì)胞復(fù)蘇實驗標(biāo)準(zhǔn)流程是將解凍后的細(xì)胞懸液先進(jìn)行離心，以去除冷凍保護(hù)液DMSO對細(xì)胞的損傷，但是離心也會對剛復(fù)蘇的狀態(tài)欠佳的細(xì)胞產(chǎn)生損傷。也有的實驗操作是將解凍后的細(xì)胞懸液先直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，第二天換液。這可能使培養(yǎng)基中少量的DMSO對細(xì)胞造成損傷。

科研實驗中，細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好，就要用好血清，如Ausbian®特級胎牛血清，它適合各種細(xì)胞培養(yǎng)，尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞，如：干細(xì)胞、肝細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控，每個批次附有詳細(xì)完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查（細(xì)菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等）、促細(xì)胞生長能力、細(xì)胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應(yīng)認(rèn)真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物"網(wǎng)站，留言技術(shù)部，得到免費幫助。）

它在國內(nèi)市場經(jīng)歷十幾年，被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇，也是細(xì)胞典藏等重大項目十幾年的供應(yīng)品牌.