細胞支原體污染是指在細胞培養(yǎng)過程中，由于外界環(huán)境、操作不當?shù)仍?，導致支原體等微生物侵入細胞內(nèi)部，影響細胞的生長和繁殖。支原體是一種無細胞壁的微生物，具有較強的抗藥性和易感性，容易在細胞培養(yǎng)過程中引起污染。因此，在進行細胞培養(yǎng)時，需要嚴格控制操作過程，防止支原體污染的發(fā)生。  

一、細胞支原體污染的原因  

外界環(huán)境：支原體廣泛存在于自然界中，如土壤、水源、空氣等。當細胞培養(yǎng)過程中使用的試劑、培養(yǎng)基、器械等受到支原體污染時，可能導致細胞支原體污染。  

操作不當：細胞培養(yǎng)過程中，操作人員的手、衣物、器械等可能帶有支原體。如果操作不當，如未進行嚴格的手部消毒、未使用無菌器械等，可能導致支原體污染。  

培養(yǎng)條件：支原體在適宜的溫度、濕度等條件下容易生長繁殖。如果細胞培養(yǎng)條件不適宜，如溫度過高、濕度過大等，可能導致支原體污染。  

細胞來源：部分細胞來源可能已經(jīng)受到支原體污染。如果使用這些受污染的細胞進行培養(yǎng)，可能導致支原體污染。  

二、檢測方法  

形態(tài)學檢測：通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常的細胞形態(tài)，如腫脹、變形、脫落等，可能是支原體污染的表現(xiàn)。  

生化檢測：通過檢測細胞培養(yǎng)上清液中的代謝產(chǎn)物，如乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶（ALP）等，判斷是否存在支原體污染。  

PCR檢測：通過PCR技術檢測細胞培養(yǎng)上清液或細胞內(nèi)的支原體DNA，以確定是否存在支原體污染。  

免疫學檢測：通過免疫熒光、ELISA等方法檢測細胞培養(yǎng)上清液或細胞內(nèi)的支原體抗原，以確定是否存在支原體污染。  

三、細胞支原體污染的預防措施  

嚴格控制操作過程：操作人員應進行嚴格的手部消毒，使用無菌器械和培養(yǎng)皿，避免交叉污染。  

使用無菌試劑和培養(yǎng)基：確保使用的試劑和培養(yǎng)基未受到支原體污染，可進行無菌處理或使用一次性產(chǎn)品。  

優(yōu)化培養(yǎng)條件：保持適宜的溫度、濕度等條件，避免細胞過度生長或死亡，降低支原體生長的機會。  

選擇優(yōu)質細胞來源：盡量選擇經(jīng)過嚴格篩選的優(yōu)質細胞來源，降低支原體污染的風險。  

四、處理措施  

更換培養(yǎng)基：發(fā)現(xiàn)后，應立即更換新的無菌培養(yǎng)基，避免支原體繼續(xù)生長繁殖。  

使用抗生素：根據(jù)支原體的敏感性選擇合適的抗生素進行治療，如紅霉素、四環(huán)素等。但需注意抗生素可能對細胞產(chǎn)生毒性作用，需謹慎使用。  

清除受污染的細胞：對于嚴重受污染的細胞，可使用胰酶消化法或機械刮除法清除受污染的細胞。  

重復檢測：處理后需重新進行支原體檢測，確保污染已得到有效控制。